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发布时间：2020-10-15 13:46 咨询量：
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产品详情
| 名称： | Mouse-DAB (Poly-HRP) Detection IHC Kit | ||||||||||||||||||||
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| 货号： | IHC0008 | ||||||||||||||||||||
| 工作液的准备 ： | √ IHC系统中可以使用许多不同的缓冲液。最常见的一种是10 mM磷酸盐缓冲液，pH 7.4 ，0.9％的磷酸盐缓冲液（PBS）。PBS-T（PBS + 0.1％Tween 20） √ 一抗工作液：根据供应商提供的稀释比例 。 √ 阻断血清和多聚HRP山羊抗小鼠Ig G ：即用型 √ DAB工作溶液（1ml）：在EP管中混匀50ul试剂A，50ul试剂B和900ul DAB底物。使用时，最好在20分钟内使用DAB工作溶液 √ 配置表
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| 试剂： |
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| 免疫组化染色介绍： | js3333线路检测中心生物采用了新的聚合酶标记系统（多聚HRP标记山羊抗小鼠IgG）。更多的酶将通过臂结构连接至一个抗体。同时，新系统的理想结构增强了免疫化学过程中的信号，减少了实验步骤 。 | ||||||||||||||||||||
| 石蜡切片的染色步骤： | 1通过二甲苯或其他清洁剂和分级酒精系列对组织切片进行脱蜡和水化处理。
2.在自来水中冲洗5分钟。 3.如果需要淬灭内源性过氧化物酶活性，则将切片在0.3％H2O2的甲醇或水中孵育30分钟 。通过使用更高浓度的H2O2可以缩短孵育时间 。如果内源性过氧化物酶活性没有问题 ，则可以删除步骤3 。 4.在缓冲液中洗涤5分钟 。 5.在37℃下用封闭血清孵育切片1小时 6.从切片上吸干多余的阻断血清。 7.将一抗在PBS缓冲液中稀释 ，在37℃下孵育切片1小时，在4℃下过夜孵育 。（如果发生背景染色，则可以在含有0.1％BSA的缓冲液中稀释一抗，请参见注释3、5） 8.在PBST缓冲液中洗涤载玻片3分钟 。 9.将切片与多HRP山羊抗小鼠Ig G在37℃孵育1小时。 10.在PBST缓冲液中洗涤载玻片3分钟 。 11.在DAB工作液中孵育切片，直到形成所需的染色强度。（见注2） 12.用自来水冲洗切片。 13.复染，清洗并封片。 | ||||||||||||||||||||
| 注意事项： | 1.不应使用含有叠氮化钠或其他过氧化物酶活性抑制剂的溶液。
2.显影时间可能会因抗原水平，所需染色剂的强度或所用底物而异 。DAB一般应显色2-10分钟；AEC 10-30分钟；TMB 5-20分钟。由于反应产物的溶解性或缺乏色彩对比，某些复染可能与某些过氧化物酶底物不兼容。可根据要求提供复染色兼容性表 。 3.仅应使用免疫组化等级BSA，因为其他制剂可能含有不需要的杂质。稀释这些试剂可能需要更长的孵育时间和/或更高的孵育温度 ，以实现最大的灵敏度 。 4.该部分应做好准备。固定（通常在甲醛含量不超过4％的福尔马林缓冲液中）应在整个染色过程中保持切片的完整性 ，但又不至于破坏所研究的抗原。在染色过程中 ，请勿使切片变干。使用加湿箱进行孵育。 5.为了避免抗体吸附到最终稀释的塑料或玻璃容器中 ，可以将初级抗体稀释在含有0.1％免疫组化级牛血清白蛋白的缓冲液中。 6.孵育时间可能会缩短。如果切片中的抗原浓度较高 ，建议与一抗，二抗和DAB试剂的孵育时间会减少 。如果抗原浓度低 ，则可以延长步骤7和9以实现最大程度的染色 |
